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蛋白质Pull-down,联用MS鉴定靶蛋白的互作蛋白质

     Pull-down技术与Co-IP非常相似,只不过后者是用抗体交联磁珠或agarose ,pull-down是用固相化的、已标记的饵蛋白或标签蛋白(生物素-、PolyHis-或GST-),从细胞裂解液中钓出与之相互作用的蛋白(对混合液中的所有蛋白)。通过Pull-down技术可以确定已知的蛋白与钓出蛋白或已纯化的相关蛋白间的相互作用关系,从体外转录或翻译体系中检测出蛋白相互作用关系。联用高分辨率质谱对pull-down拉下来的蛋白复合物进行进一步鉴定,就能检测出与靶蛋白相互作用的蛋白质。

实验线路:

         

 

质谱鉴定实验流程(胶内酶解或溶液内酶解)
1:胶内酶解
  
2:溶液内酶解
    
 
使用仪器
Thermo Scientific Q Exactive (高分辨质谱)
                    


技术优势
适合中度复杂的蛋白质样品, 如相互作用的蛋白质条带和洗脱液; 高准确性, 高灵敏度。
实验报告内容
1、相互作用蛋白质谱鉴定结果(excel 列表);
2、完整的实验步骤、使用仪器、试剂来源、软件检索参数等。
 
蛋白样品送样要求

样品 样品要求
SDS-PAGE条带 考染,条带清晰可见
蛋白质溶液 蛋白质总量>5μg,浓度>0.1μg/μl;
说明裂解液和洗脱液成分,浓度信息
 

                                 
实验样本预处理及运输注意事项
为保证高质量的技术服务结果,请您参照以下说明对实验样本进行处理和保存:
⊙蛋白洗脱液:定量并计算总蛋白量,真空干燥后,密封好管口,冰袋包装寄送。
⊙蛋白质条带(考染):从凝胶上割取条带时,避免污染,将条带放入EP管内,密封好管口,冰袋包装寄送。
特别提醒:快递寄送样本运输过程中,可能晃动幅度会比较大,请做好基本运输防护措施。
注:在寄送样本时,请填写好样本登记表,随样本一同寄往本公司。
 

参考文献:

Mohammad Abu-Odeh, et al. (2014) CharacterizingWWDomain Interactions of Tumor Suppressor WWOX Reveals Its Association with Multiprotein Networks.  JBC,  VOL. 289, NO. 13, pp. 8865–8880

Magdalena Wisniewska, et al. (2014) Functional and Structural Properties of a Novel Protein and Virulence Factor (Protein sHIP) in Streptococcus pyogenes* JBC,  VOLUME 289, 18175-18188

 

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