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IP-MS/Co-IP-MS, 互作蛋白检测及鉴定

大分子相互作用蛋白鉴定是深入理解目标分子作用机制的基础。包括DNA、RNA和蛋白质互相作用蛋白。

免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。 是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 细胞在非变性条件下被裂解时,细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。当用预先固化在argarose beads或者magnetic beads上的蛋白质A的抗体免疫沉淀A蛋白,那么与A蛋白在体内结合的蛋白质B也能一起沉淀下来。洗脱结合物后通过质谱鉴定分析。

以检测细胞内与FGF1蛋白相互作用的分子为例:

                

质谱鉴定实验流程(胶内酶解或溶液内酶解)
1:胶内酶解
  
2:溶液内酶解
        
 
使用仪器
Thermo Scientific Q Exactive (高分辨质谱)
                    


技术优势
适合中度复杂的蛋白质样品, 如相互作用的蛋白质条带和洗脱液; 高准确性, 高灵敏度。
实验报告内容
1、相互作用蛋白质谱鉴定结果(excel 列表);
2、完整的实验步骤、使用仪器、试剂来源、软件检索参数等。
 
蛋白样品送样要求

样品 样品要求
SDS-PAGE条带 考染,条带清晰可见
蛋白质溶液 蛋白质总量>5μg,浓度>0.1μg/μl;
说明裂解液和洗脱液成分,浓度信息
 

                                 
实验样本预处理及运输注意事项
为保证高质量的技术服务结果,请您参照以下说明对实验样本进行处理和保存:
⊙蛋白洗脱液:定量并计算总蛋白量,真空干燥后,密封好管口,冰袋包装寄送。
⊙蛋白质条带(考染):从凝胶上割取条带时,避免污染,将条带放入EP管内,密封好管口,冰袋包装寄送。
特别提醒:快递寄送样本运输过程中,可能晃动幅度会比较大,请做好基本运输防护措施。
注:在寄送样本时,请填写好样本登记表,随样本一同寄往本公司。
 
参考文献:

Tolga O. Bozkurta, et al. (2011) Phytophthora infestans effector AVRblb2 prevents secretion of a plant immune protease at the haustorial interface. PNAS, 2011, vol. 108 , no. 51, 20832–20837 

Susanne B. et al. (2012) Detection of a rare BCR–ABL tyrosine kinase fusion protein in H929 multiple myeloma cells using immunoprecipitation (IP)-tandem mass spectrometry (MS/MS),  PNAS, October 2, 2012 | vol. 109 | no. 40, 16190–16195

Kim-kP., et al. (2016) The Endoplasmic Reticulum Chaperone Calnexin Is a NADPH Oxidase NOX4 Interacting Protein. JBC, VOL.291, NO.13, 7045-7059 
 
Chang L, et al. (2016) Co-immunoprecipitation with Tau Isoform-specific Antibodies Reveals Distinct Protein Interactions and Highlights a Putative Role for 2N Tau in Disease. JBC. 291, 8173-8188.
 
 
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